食物中的有机物经酸氧化分解,使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。 此化合物经对苯二酚、亚硫酸钠还原成兰色化合物--钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值,以测定磷的含量。反应式为:
h3po4+12(nh4)3moo4+21hno3→(nh4)3po4·12moo3+21nh4no3+12h2o2.适用范围
依据中华人民共和国国家标准:gb12393-90, 此方法适用于所有食品及保健品中磷元素含量的测定。3.仪器
722可见分光光度计4.试剂
(1) 硝酸(g.r), 高氯酸(g.r) 硫酸(a.r)
(2) 混合酸消化液:硝酸+高氯酸 按4+1混合
(3) 15%(v/v)硫酸溶液:取15ml硫酸缓慢加入到80ml水中,并定容至100ml。
(4) 5%(w/v)钼酸铵溶液:取5g钼酸铵,用15%硫酸溶液稀释至100ml。
(5) 对苯二酚溶液:取0.5g对苯二酚于100ml水中,溶解后加一滴浓硫酸。
(6) 20%(w/v)亚硫酸钠溶液(注:此溶液需在每次实验前临时配制):称取一定量的亚硫酸钠,用蒸馏水溶解即可。
(7) 标准质控物:猪肝粉(国家标准物质研究中心提供),质控物需室温干燥保存。
(8) 国家标准物质中心提供:磷标准储备溶液,浓度为1000μg/ml
(9) 标准中间液的配制:吸取1ml磷标准储备溶液,然后移入100ml容量瓶中,用去离子水定容至100ml ,浓度为10mg/l5.操作步骤
5.1样品消化:实验操作需在无元素污染的环境中进行。准确称取样品干样(0.3-0.7g左右),湿样(1.0g左右),饮料等其他液体样品 (1.0-2.0g左右),然后将其放入50ml消化管中, 加混酸15ml(油样或含糖量高的食品可多加些酸),过夜。次日,将消化管放入消化炉中,消化开始时可将温度调低(约130℃左右),然后逐步将温度调高(*终调至240℃左右)进行消化,一直消化到样品冒白烟液体变成无色或黄绿色为止。若样品未消化*可再加几毫升混酸,直到消化*。消化完后,待凉,再加5ml去离子水,继续加热,直到消化管中的液体约剩2ml左右,取下,放凉,然后转移至10ml试管中,再用去离子水冲洗消化管2-3次,并*终定容至10ml。
样品进行消化时,应同时做样品空白消化。
5.2磷标准曲线:分别吸取标准储备液1.0ml、3.0ml、5.0ml至20ml刻度试管中,然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液,加蒸馏水定容至20ml,混匀,静置30分钟,在波长660nm处测定其吸光度,由此计算出回归系数,利用回归方程计算或绘制成校正曲线。
5.3测定:取样品及空白液各2ml分别至20ml试管中,然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液,加蒸馏水定容至20ml,混匀,静置30分钟,在波长660nm处测定其吸光度,并根据测出的吸光度在标准曲线上算得未知溶液中的磷含量。6.计算
x (mg/100g) = (c∕m )×(v1∕v2 )×100
式中:x----样品中磷含量,mg/100g
c----由标准曲线及回归方程算得样品测定液中磷含量,mg
m---称样量 g
v1---消化液定溶总体积,ml
v2-测定用消化液的体积,ml
此元素*低检出限为2μg7.注意事项
(1) 亚硫酸钠溶液*好每次实验前临时配制,否则可能会使钼蓝溶液发生浑浊。
(2) 其次定容完后,静置时间不亦过长,否则溶液颜色将会加深,其结果不准确。
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