一、实验仪器与试剂
表格一：实验仪器
仪器
透射电子显微镜
超薄切片机
表格二：试剂
试剂
pbs（ph7.4）
无水乙醇
丙酮
1%
pon812包埋套装
醋酸双氧铀
醋酸铅
二、实验步骤
1. 醛类固定：加入1ml 2.5%戊二醛溶液（pbs稀释），4度固定过夜；
2．清洗：用pbs清洗4次，每次静置15min；
3．固定：用1%溶液4度固定2h；
4．清洗：用pbs清洗4次，每次静置15 min；
5．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各静置15min(在70%乙醇中静置过夜)，再用100%乙醇脱水2次，每次静置20min；
6．置换：用丙酮置换2次，每次静置15min；
7. 浸渍：过程如下：
a．丙酮：包埋剂=2：1（体积比）的浸渍液中浸渍1h；
b．丙酮：包埋剂=1：2（体积比）的浸渍液中浸渍4h；
c．纯包埋剂浸渍2次,每次24h；
8． 包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；
10．聚合：将包埋板置于65℃条件下各聚合48h以上；11．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm；
12．超薄切片：切片厚度70nm；
13．染色：醋酸双氧铀染色10min后清洗；
醋酸铅染色10min后清洗；
14.上机检测。透射电镜制备注意事项(细胞)
1、细胞数量: > 1*10的6次方;
2、消化细胞时要注意不要过度，及时用含血清的培养液终止消化;
3、终止消化后，预冷的pbs (ph 7.4 )洗细胞1-2次离心(1500rpm, 5min)弃上清(细胞收集在1.5ml的ep管中) ;
4、加入1ml 2.5%戊二醛溶液(需用pbs配制该溶液)，可用吸管轻轻吹散细胞，使细胞悬浮于固定液中;
5、4度固定过夜后寄出(寄送时加冰袋，并用2.5%戊二醛溶液将ep管中剩余空间充满)。
肾脏组织样本制备步骤：
1、迅速取材；2、pbs漂洗2次，切成小块（米粒大小）；3、快速放入2.5%戊二醛固定液中，4度固定过夜；4、固定液将整个容器里面的空间都充满，封口膜封口；5、多加冰袋运输。
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