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WB实验中条带不跑歪的秘诀

2024/3/1 2:47:39发布24次查看
在做 western blot 实验时,你一定会遇到各式各样的条带,最常见的就是条带跑歪了,如凹型条带、凸型条带、斜条带、条带拖尾等。如何更好的做好wb实验,让我们一起来看看wb实验中条带不跑歪的秘诀吧!
一、凹凸条带的原因和解决办法
可能原因:可能是由于胶未配好(凝胶未能wan全聚合,胶中有颗粒或气泡,凝胶未冷却好,),也可能是电压过高。
解决方法:正确添加质量合格且未过期的 ap 及 temed;过滤配胶的试剂保证配胶过程中胶内无气泡;凝胶冷却好后再上样;降低电压。
二、条带出现黑点或黑斑的原因和解决办法
可能原因:试剂污染,抗体结合到封闭剂。
解决方法:使用新鲜配置的试剂;过滤封闭液;选用其他类型封闭液。
三、条带中出现边缘规则的白圈的原因和解决办法
可能原因:转膜时膜和胶中间有气泡,或抗体在膜上未均匀分散。
解决方法:制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡;使用摇床孵育抗体。
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