1 l--*含量的测定
1.1实验仪器与试剂
*样品，甲醇，sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站，0.03%kh2po4溶液
1.2 hplc色谱分析条件
流动相为0.03%kh2po4溶液（a）-甲醇（b），线性梯度淋洗，流速1.0ml/min，柱温 35℃，检测波长276nm。
流动相时间（t/min）
5101520
a（%）80908070
b（%）20102030
1.3标准溶液的配制
精密称取*标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取*样品适量，同法操作。
1.4标准直线的制作
精密称取*标准样品适量 ,分别稀释制成每1ml 中含*50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以*峰面积a为纵坐标，浓度c为横坐标，制作回归标准直线。
1.5 发酵液中样品中*含量的测定
取发酵液，稀释配制成约 500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2l-*含量的测定
2.1实验仪器与试剂
l-*标准样品，乙腈，sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站，磷酸二氢铵。
ph计，磷酸，
2.2 hplc色谱分析条件
流动相: 以磷酸二氢铵溶液 （ 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m溶解后, 用磷酸调节ph 值至2.0±0.1, 加水稀释至 1000ml ） - 乙腈为流动相，线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.3标准直线的制作
精密称取*标准标准品50mg，置100ml 容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取*样品适量，同法操作。精密称取*标准样品适量 ,分别稀释制成每1ml 中含*50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以*峰面积a为纵坐标，浓度c为横坐标，制作回归标准直线。
2.4发酵液中样品中*含量的测定
取发酵液，稀释配制成约 500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl 进样，在液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
3l-*含量的测定
3.1实验仪器和试剂
乙酸铵溶液；乙腈；l-*标准样品；sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站。
3.2ｈｐｌｃ色谱分析条件
流动相:a为0.02%mol/l乙酸铵溶液（ph=6.5）:b为乙腈，线性梯度淋洗；流速: 110 ml/min ；柱温:30℃；进样量:２0μl。
梯度洗脱表3
流动相时间（t/min）
102030405060
a（%）806040406080
b（%）204060604020
3.3标准直线的制作
方法同2.2节
3.4发酵液中样品中*含量的测定
方法同2.5节
4l-*含量的测定
4.1 实验仪器和试剂
l-*标准样品；甲醇；醋酸钠；sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站。
4.2 hplc色谱分析条件
流动相: a为甲醇 , b为 50 mmol /l的醋酸钠缓冲溶液;流速1 . 0 ml /min;梯度洗脱见表1，测定波长为 262 nm，柱温为30℃。
梯度洗脱表4
流动相 时间（t/min）
102030405060
a（%）30508085100100
b（%）7050201500
4.3 标准直线的制作
方法同2.2节
4.4 发酵液中样品中*含量的测定
方法同2.5节
5回收率实验
称取*标准液50μg/ml分别稀释0、1、2、4、6、8、10倍，每份取1ml，按标准样品处理方法，过滤，测定标准样品中的*的含量，计算回收率。
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