1.使用dmso前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破华它的分子结构，以至于降低冷冻保护效果。在常温下，dmso对人体有害，故在配制时戴上手套操作。
2.不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温度区内，是“危险温区”。
3.注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。
简便方法：
胰蛋白酶液消化>>离心>>pbs液1ml洗涤，吹打制成待测atcc细胞悬液>>取1ul悬液+9ulpbs>>细胞计数：
1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上.
2.用10ul枪头将细胞悬液注入计数板，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大铬(每个大格含有16个中铬)的细胞数目。
4.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度：
(atcc细胞悬液的细胞数)/ml=(四个大格子细胞数/4)×106