实验原理：
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (elisa) 。往预先包被有人胰岛素(ins) 捕获抗体的微孔中，依次加入样本、标准品、生物素标记的检测抗体，hrp酶结合物，中间经过温育和洗涤，用底物 tmb显色，tmb 在过氧化物酶(hrp)的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胰岛素 (ins) 呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度 (od值) ，计算样品浓度。
操作步骤：
1. 从室温平衡 10 分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 加样：分别将样品或不同浓度标准品按照 100 μ l每孔加入相应孔中，空白孔加入 100μl通用稀释液。盖上封板膜后 37℃温育 1 小时。 (建议：将待测样本用通用稀释液稀释1倍后再加入酶标板内测试。从而减少基质效应对测试结果的误差影响，最后计算样本浓度时需乘以对应的稀释倍数。所有的待测样本和标准品在检测中建议设立复孔) 。
3. 加生物素化抗体：取出酶标板，弃去液体，不用洗涤。每孔直接加入生物素化抗体工作液 100 μl，盖上封板膜后 37℃温育 1 小时。
4. 洗板：弃去液体，每孔加入 300 μl1x洗涤液，静置 1 分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板
3 次 (也可用洗板机洗板) 。
5. 加酶结合物工作液：每孔加入酶结合物工作液 100 μl，盖上封板膜后 37℃温育 30 分钟。
6. 洗板：弃去液体按步骤 4 洗涤方法，洗板 5 次。
7. 加底物：每孔加入底物(tmb)90 μl，盖上封板膜，37℃避光温育 15 分钟。
8. 加终止液：取出酶标板，每孔直接加入终止液 50 μl，立即在 450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断：
1. 计算标准品和样本复孔的平均 od值并减去空白孔的od值作为校正值。以浓度为横坐标，od值为纵坐标，在双对数坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。
2. 若样品od值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
典型数据和参考曲线：
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
浓度 (ng/ml)
10
5
2.5
1.25
0.625
0.312
0. 156
0
od值
2.22
1.56
0.92
0.63
0.42
0.25
0. 18
0.08
校正 od值
2. 14
1.48
0.94
0.55
0.34
0. 17
0.1
-
试剂盒性能：
1. 重复性：板内变异系数小于 10%，板间变异系数小于 10%。
2. 回收率：在选取的健康人血清、血浆和组织匀浆中加入 3 个不同浓度水平的人 ins，计算回收率
样本类型
范围
平均回收率
血清 (n=8)
84- 101
96
血浆(n=8)
92- 105
102
细胞培养上清(n=8)
96- 108
105
3. 线性稀释：分别在选取的 4 份健康人血清、血浆和组织匀浆中加入高浓度人 ins，在标准曲线动力学范围
内进行稀释，评估线性。评估线性。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 6
稀释比例
回收率 (%)
血清
血浆
细胞 培养 上
清
1 ：2
范围 (%)
84-95
88-96
90- 110
平均回收率 (%)
91
93
96
1 ：4
范围 (%)
89- 103
87- 108
105- 115
平均回收率 (%)
94
98
108
注意事项：
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃ 。使用
后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响od值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂
的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。