kras热度已经消退了？no...据调查，现在除传统针对kras靶点小分子药物外，更多玩家尝试新兴疗法征服这一“不可成药”的难题，如疫苗，tcr-t疗法等。kras可以被细胞外信号以及来自细胞器等亚细胞结构的信号所激活。在正常的生理环境下，野生型kras主要处于不活跃的gdp结合状态。信号促使kras脱离gdp，并与gtp结合，将kras转化为激活状态。激活的kras能够结合并激活效应蛋白，如raf激酶、pi3k和ralgds，促进下游级联的信号通路，如mapk、pi3k和ral-gefs通路。这些信号通路通过细胞复制、生长、分化和促进细胞周期进程。一个激活的致癌kras基因导致一个突变的kras蛋白，由于gtp水解率大大降低，异常长时间保持其活性gtp结合状态。当kras蛋白被困在“on”位置时，下游效应通路也保持活跃，细胞增殖率保持很高。其他仍然活跃的效应通路包括那些促进肿瘤发展过程的通路，如有丝分裂、细胞迁移、肿瘤侵袭和血管生成。一、高通量筛选试剂盒htrf®技术提供均相，免洗kras结合检测试剂盒，通过这些已验证的试剂盒，可直接用于抑制剂筛选，无需优化，每个试剂盒配有重组蛋白、检测试剂和缓冲液。如下图所示，使用抗tag1-sos1（供体）和抗tag2-xl665（受体）检测tag1-sos1与tag2-kras-g12c之间的相互作用。当供体和受体抗体由于sos1和kras-g12c结合而接近时，供体抗体的激发触发向受体抗体的荧光共振能量转移（fret），受体抗体在665nm处特异性发射。这种特异性信号与kras-g12c/sos1相互作用的程度成正比。因此，化合物或抗体阻断kras-g12c/sos1的相互作用会导致htrf®信号的减少。使用已知抑制剂对试剂盒进行验证，均获得相应较好的ic50并且与已报道文献结果相一致。相关推荐：
货号 产品名称 规格
63adk000cb15peg kras-wt/sos1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb19peg kras-wt/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb47peg kras-g12d/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb17peg kras-g12d/sos1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb20peg kras-g12c/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb16peg kras-g12c/sos1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb22peg kras-g12v/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb28peg kras g12v gtp binding kit 500 tests
二、kras靶点相关蛋白全部kras相关蛋白均已原核表达系统（e.coli）进行表达。通过htrf方式验证其结合活性。1、kras wtthe kras-wt activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras- wt protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.
2.kras-g12cthe kras-g12c activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g12c protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.3.kras-g12dthe kras-g12d activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g12d protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal4.kras-g12rthe kras-g12r activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g12r protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.5.kras-g12vthe kras- g12v activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras- g12v protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.6.kras-g13cthe kras-g13c activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g13c protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.7.kras q61hthe kras-q61h activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-q61h protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.8.sos19.raf相关推荐：
货号 品名 规格
ua080001 kras 100μg
ua080002 kras[g12c] 100μg
ua080003 kras[g12v] 100μg
ua080004 kras[g12d] 100μg
ua080005 kras[g12r] 100μg
ua080006 kras[g13c] 100μg
ua080007 kras[g13d] 100μg
ua080008 kras[q61h] 100μg
ua080014 craf 50μg
ua080015 craf 50μg
ua080016 sos1 100μg
*以上kras蛋白无gtp bound，如需gtp bound，可联系优宁维。上述蛋白，常规规格有：50μg，100μg和1mg，如需更大规格，可联系优宁维定制。三、anti-tag抗体话说，不想用试剂盒的情况下，如何建立assay呢？蛋白已经有了，还差检测抗体...这不就来了！anti-tag的htrf荧光抗体，在实现高通量，操作简便等其他技术优势的同时，可以为assay的建立提供最大的灵活性。无关乎蛋白本身，仅针对标签如his，gst，flag等，选择对应的配对抗体即可实现实验方法学开发。比如：参考上述蛋白kras g12c（his tag）和sos1（gst tag），选择抗体配对有几种方式可供参考：
kras donor sos1 accpetor
anti his eu anti gst xl665
anti gst d2
anti his tb anti gst xl665
anti gst d2
kras accpetor sos1 donor
anti his xl665 anti gst eu
anti his d2
anti his xl665 anti gst tb
anti his d2
ppi - europium detection buffer
ppi - terbium detection buffer
下图为anti-gst-tb sos1与anti-his-xl665 kras g12c搭配组合展示。相关推荐：
anti-tag antibodies
货号 品名 规格
61hisdlf mab anti 6his-d2 1000 tests
61hiskla mab anti 6his-eu cryptate 5000 tests
61hi2kla mab anti 6his-eu cryptate gold 5000 tests
61histlf mab anti 6his-tb cryptate 1000 tests
61hi2tlf mab anti 6his-tb cryptate gold 1000 tests
61hisxlf mab anti 6his-xl665 1000 tests
61mycdaf mab anti cmyc-d2 1000 tests
61myckla mab anti cmyc-eu cryptate 5000 tests
61myctaf mab anti cmyc-tb cryptate 1000 tests
61mycxlf mab anti cmyc-xl665 1000 tests
61dnpkla mab anti dnp-eu cryptate 5000 tests
61dnpxla mab anti dnp-xl665 5000 tests
61fg2dlf mab anti flag m2-d2 1000 tests
61fg2kla mab anti flag m2-eu cryptate 5000 tests
61fg2tlf mab anti flag m2-tb cryptate 1000 tests
61fg2xlf mab anti flag m2-xl665 1000 tests
61gstdlf mab anti gst-d2 1000 tests
61gstkla mab anti gst-eu cryptate 5000 tests
61gsttlf mab anti gst-tb cryptate 1000 tests
61gstxlf mab anti gst-xl665 1000 tests
610hadaf mab anti ha-d2 1000 tests
610hakla mab anti ha-eu cryptate 5000 tests
610hataf mab anti ha-tb cryptate 1000 tests
610haxlf mab anti ha-xl665 1000 tests
61mbpdaa mab anti mbp-d2 5000 tests
61mbpkaa mab anti mbp-eu cryptate 5000 tests
61mbptaa mab anti mbp-tb cryptate 5000 tests
buffers
货号 品名 规格
61db9rdf ppi - europium detection buffer 200ml
61db10rdf ppi - terbium detection buffer 200ml
三、下游磷酸化蛋白检测alpha®和htrf®技术基于细胞水平进行下游kras信号通路的研究，包括mapk、pi3k和ral-gefs通路。这些细胞信号分析能够区分化合物调节下游kras通路的功效。htrf®仍然利用夹心法原理，标记的特异性抗体识别磷酸化蛋白和总蛋白从而进行定量检测。全过程无需洗涤，特异性好，灵敏度高。下图为p-erk（图左）和p-nfkb（图右）磷酸化试剂盒灵敏度与wb对比，灵敏度高出30倍不等。与htrf®技术不同，alpha®虽然也是均相检测检测技术，但其基于化学发光原理，利用两个微珠进行检测来实现更低的实验背景和超高灵敏度。一个抗体被生物素化并与链霉亲和素包被的供体微珠结合，受体微珠则直接与另一个抗体结合。抗体与磷酸化蛋白（总蛋白）结合使供体和受体微珠靠近。供体微珠的激发使得单线态氧扩散至受体微珠，从而发射615nm波长的光信号。alpha®的检测信号与样本中存在的磷酸化蛋白（总蛋白）的数量成正比。alpha®原理如下图。相关推荐：
货号 产品名称 规格
64nfbpeg nfkb phospho-s536 kit 500tests
64nftpeg nfkb total kit 500tests
64aerpeg advanced phospho-erk (thr202/tyr204)cellular kit 500tests
64nrkpeg total erk cellular kit 500tests
64me1peg phospho-mek1 (ser218/222) cellular kit 500tests
64ne1peg total mek1 cellular kit 500tests
64aktpeg phospho-akt1/2/3 (thr308) cellular kit 500tests
64akspeg phospho-akt1/2/3 (ser473) cellular kit 500tests
64nktpeg total akt cellular kit 500tests
64aktpeg htrf phospho-akt (thr308) detection kits 500tests
64torpeg phospho-mtor (ser2448) cellular kit 500tests
alsu-pakt-b500 alphalisasurefire ultraakt 1/2/3 (ps473) assay kit 500assays
alsu-takt-b500 total akt1/2/3 alphalisasurefire ultradetection kit 500assays
alsu-pmtor-c500 alphalisaphospho-mtor (ser2448) assay kit 500assays
alsu-tmtor-b500 alphalisa total mtor assay kit 500assays
四、3d细胞增殖基于atp的发光法测定细胞增殖和细胞毒性的分析原理。用适当缓冲液直接裂解细胞后，对细胞atp进行定量。在裂解细胞释放的atp作用下，atp与添加的荧光素反应产生光。atplite 3d and atplite 1step 3d assay 操作流程如下：atplite 3d检测可以允许细胞密度较高情况下进行检测，并且比2d检测效果明显。相关推荐：
货号 产品名称 规格
6066736 atplite 1step 3d 10ml/100tests
6066943 atplite 3d 300tests
6016736 atplite 1step luminescence assay system 10ml
6016731 100ml
6016739 1000ml
6016943 300 assay
6016941 atplite luminescence assay system 1000 assay
6016947 5000 assay
6016949 10000 assay
四、微孔板耗材1.3d细胞培养板①板底为高度生物相容的，超低吸附力聚合物包被du有的合成聚合物mpc，源于细胞膜组分，与极性基团的磷脂（磷脂酰胆碱）具有相同的结构，提供自然生长环境，并消除批间差异。②易形成形态大小均匀的球体细胞球体高质量形成率，细胞形态均已一致，板材的均匀性高，可随时聚焦进行图片拍摄，提供重复性更高的数据及更高效更高质量的成像。③无需更换培养基实验的佳选择圆底板，性价比高。相关推荐：
货号 产品名称 规格
6055330 cellcarrier spheroid ula microplates case of 10
6055334 case of 40
2. 其他相关培养板，检测板
底透微孔板（view plate）
实验应用 颜色 特点 孔数目 case of 40 case of 50 case of 60 case of 160
化学发光实验 白色 底透，tc处理 96孔
6005181
384孔
6007480
黑色 底透，tc处理 96孔
6005182
384孔 6007460
标准微孔板（optiplate）
实验应用 颜色 特点 孔数目 case of 40 case of 50 case of 60 case of 160
化学发光实验荧光实验 白色 非底透 96孔
6005290
384孔
6007290
黑色 非底透，tc处理 96孔
6005270
384孔
6007270
细胞培养板（culturplate）
实验应用 颜色 特点 孔数目
case of 50 case of 160 case of 200
细胞培养 白色 非底透，tc处理 24孔
6005168
96孔
6005680 6005688 6005689
384孔
6007680 6007688 6007689
黑色 非底透，tc处理 96孔
6005660 6005668 6005669
384孔
6007660 6007668
htrf*alpha检测微孔板
应用领域 颜色 特点 孔数目 case of 25 case of 50
case of 200
htrf实验 白色 非底透，潜孔 96孔 66pl96025
6005359
alpha实验 384孔
6008280
6008289
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上海优宁维生物科技股份有限公司
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