方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×pcr buffer
5 μl dntp mix (2mm)
4 μl 引物1(10pm)
2 μl 引物2(10pm)
2 μl taq酶 (2u/μl)
1 μl dna模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddh2o至 50 μl
视pcr仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置pcr仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3结束反应,pcr产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
人肾小球内皮细胞*培养基
人肾管状上皮细胞*培养基
人肾皮层上皮细胞*培养基
人肾上皮细胞*培养基
人输尿管上皮细胞*培养基
人肾实质细胞*培养基
人肾系膜细胞*培养基
人膀胱上皮细胞*培养基
人膀胱平滑肌细胞*培养基
人肾动脉内皮细胞*培养基
人肾动脉平滑肌细胞*培养基
人肾成纤维细胞*培养基
人膀胱成纤维细胞*培养基
人尿道上皮细胞*培养基
人肾足突细胞*培养基
人心房肌细胞*培养基
人心室肌细胞*培养基
人心肌成纤维细胞*培养基
人心脏微血管内皮细胞*培养基
人主动脉内皮细胞*培养基
人主动脉平滑肌细胞*培养基
人脐静脉内皮细胞*培养基
人脐动脉内皮细胞*培养基
人脐静脉平滑肌细胞*培养基
人脐动脉平滑肌细胞*培养基