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核酸检测的检测方式 怎么才能检测出来

2023/3/6 8:03:05发布75次查看
1、核酸序列依赖性扩增法,nasba是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增rna的新技术。反应在 42 ℃进行 ,可在2h内将rna模板扩增约109倍。nasba原理是提取病毒rna,加入amv逆转录酶、rna酶h、t7rna聚合酶和引物进行扩增。整个反应分非循环相和循环相:在非循环相中,引物i与模板rna退火后在amv逆转录酶的作用下合成cdna,形成rna:dna杂合体,随即rnaseh降解rna,引物ⅱ与cdna 退火, 在反转录酶作用下合成第2条dna互补链。双链dna可在t7rna聚合酶的作用下,经其启动子序列起动而转录rna,rna又可在反转录酶的作用下反转录成dna,进入循环相,对模板进行大量扩增。
2、转录介导的扩增技术,tma技术原理与nasba基本一致,略有不同之处是tma利用的是mmlv逆转录酶及t7 rna聚合酶两种酶,mmlv逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有rna酶h活性。反应在41.5 ℃进行,可在1h内将rna模板扩增约109倍。
3、连接酶酶促链式反应(lcr),lcr是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种探针扩增技术,是继pcr后新发展的一种较有前景的体外扩增技术。它的原理就是由2段寡核苷酸单链dna探针与目标序列杂交,当该2段dna探针与没有发生突变的模板褪火后,如果2探针是紧邻的,中间没有核苷酸间隔,则可在连接酶作用下连接起来,连接以后的新链又可以作为模板,引导下一周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核苷酸的碱基突变,则连接反应不能发生,扩增反应终止。
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