抗体(antibody)是生物体在抗原物质刺激下，由b细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白(ig)。按抗体的来源，可将其分为天然抗体和人工制备的抗体，是通过对特定生物体免疫接种特定抗原物质后而获得。人工免疫动物制备的抗体应用甚为广泛，既可以用于科学研究，也可以用于疾病的预防、诊断和治疗。
一、抗体的基本结构
经x线晶体衍射结构分析发现，抗体ig由四条多肽链组成，各肽链之间由数量不等的链间二硫键连接。ig可形成“y”字型结构，称为ig单体，是构成抗体的基本单位。
（一）重链和轻链
天然ig分子含有四条异源性多肽链，其中，分子量较大的两条链称为重链(heavy chain, h)，而分子量较小的两条链称为轻链(light chain, l)。同一ig分子中的两条h链和两条l链的氨基酸组成完全相同。
1. 重链分子量为50000～75000，由450～550个氨基酸残基组成。重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，其抗原性也不同。据此，可将抗体ig分为5类(class)，即igm、igd、igg、iga和ige, 其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链和ε链，商品化的抗体绝大部分都是igg。不同类的ig具有不同的特征，如链内和链间二硫键的数量和位置、结构域的数量及铰链区的长度等均不完全相同。即使是同一类的ig，其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数量、位置也不同，据此又可将同类ig分为不同的亚类(subclass)。
igg的亚类
利用不同种属动物制备的igg存在不同的亚类，常见的不同种属igg亚类如下：
• 兔: igg（无亚类）
• 小鼠: igg1, igg2a, igg2b, igg2c, igg3
• 大鼠: igg1, igg2a, igg2b, igg2c, igm
• 山羊: igg1, igg2
在进行某些抗体相关实验(如if和fcm)的时候，我们常常需要仔细看一下所订购商品化抗体的igg亚类，以方便我们选择同型对照(isotype control) igg (即与目的蛋白抗体相同来源种属的相同类型正常igg)作为抗体的阴性对照进行平行实验，以排除可能的非特异性染色结果。
2. 轻链分子量约为25000，由214个氨基酸残基构成。轻链可分为两种，分别为kappa(κ)链和lambda(λ)链。据此，可将lg分为两型(type)，即κ型和λ型，一个ig分子上两条轻链的型别总是相同的。生物体内可同时存在κ型和λ型的ig分子，不同种属生物体内两型轻链的比例不同。正常人血清ig的κ: λ约为2:1，而在小鼠则为20:1。根据λ链恒定区个别氨基酸的差异，又可将λ链分为λl、λ2、λ3和λ4四个亚型(subtype)。
（二）可变区和恒定区
通过分析不同ig重链和轻链的氨基酸序列发现，重链和轻链靠近n端的约110个氨基酸序列变化很大，其他部分氨基酸序列相对恒定。因此，将ig轻链和重链中靠近n端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区(variable region, v区)，占重链1/4，占轻链1/2；将靠近c端的氨基酸序列相对稳定的区域，称为恒定区(constant region, c区)，占重链3/4，占轻链1/2。
1．可变区 重链和轻链的v区分别称为vh和vl。vh和vl中各含有3个氨基酸组成和排列顺序高度可变的区域，称为高变区(hypervariable region, hvr)或互补决定区(complementarity determining region, cdr), 包括hvr1(cdr1)、hvr2(cdr2) 和hvr3(cdr3)，其中，hvr3(cdr3)变化程度更高。vh的3个高变区分别位于29～31、49～58和95～102位氨基酸，而vl的3个高变区分别位于28～35、49～56和91～98位氨基酸。vh和vl的3个cdr共同组成ig的抗原结合部位(antigen binding site)，决定抗体的特异性，是抗体识别及结合抗原的部位。
2．恒定区 重链和轻链的c区分别称为ch和cl。不同型(κ或λ)ig的cl长度基本一致，但是不同类ig的ch长度不同，例如igg、iga和igd包括ch1、ch2和ch3, 而igm和ige则包括chl、ch2、ch3和ch4。
（三）铰链区
铰链区(hinge region)位于ch1与ch2之间，富含脯氨酸，易伸展弯曲，从而改变抗原结合部位之间的距离，有利于抗体结合位于不同位置的抗原表位。铰链区易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解，产生不同的水解片段。
抗体的纯化
我们知道，一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体，血清蛋白以及其他各种杂蛋白等，在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后，需要对免疫血清进行纯化提取得到效价更高，特异性更强，稳定性更好的抗体。
目前，大多数商品化抗体使用protein a或protein g进行纯化。由于protein a或protein g 可以和抗体igg分子的fc段特异性结合。protein a或protein g 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上，当抗血清从中流过时，特异性的igg就与配基结合，其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同，我们需要具体情况，分别选择protein a 或protein g, 或者是protein a/protein g组合。一般兔抗（包括单克隆蛋白与多克隆抗体）、小鼠单抗igg2a、igg2b、igg3, 选择用protein a纯化；而小鼠、大鼠和山羊的多克隆抗体、小鼠单抗igg1、大鼠单抗，则选择用protein g纯化。
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