在elisa试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血*收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。可用作elisa测定的标本十分广泛，体液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份，elisa试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。
elisa试剂盒的操纵因固相载体的形成不同而有所差异，海内医学检修一般均用板式点。除特殊情况外，在医学检修中均以血清作为检测标本。加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性hrp，也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴，以发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。优质的试剂，良好的仪器和准确的操纵是保证elisa试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。elisa顶用的蒸馏 水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定（如血清 、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。
elisa试剂盒的5个步骤
elisa试剂盒测定步骤：固相包被→加待测样品→温育→洗刷+加酶标物→温育→洗刷→加底物→温育一加停止液→比色→判定成果。
elisa试剂盒操作较繁杂,在操作中应留意以下5个方面。
1. 跟着病情的进展或由其他因素影响，某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
2. 加样一般运用加液器，在elisa试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加停止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶结合物、底物和停止液时则不需更换吸嘴。
3. 在成批手艺检测中，还应留意操作时差的影响。加样及混匀时刻的差异，使抗原抗体反响和酶促反响时刻不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留意可能会导致错误成果或定量不准。
4. 洗刷是elisa试剂盒操作过程中决定试验胜败的一个关键步骤。意图是除去未结合的免疫反响物，停止抗原抗体反响，除去标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手艺洗板，前者洗刷质量较好，各反响孔洗刷作用均一，批内、批间差异小，手艺洗板应留意操控各孔洗刷作用，差异不宜太大。
5. 精确判定成果须运用elisa试剂盒测读仪，比色法判读可选择单波长或双波长，依据反响液色彩的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。
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