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>>>背景导读
测定dna合成情况是细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、dna复制及修复、信号通路等研究方向常用方法之一，用到的检测试剂主要是胸腺嘧啶核苷酸类似物（brdu、edu），两种试剂在检测方面有一些不同之处。brdu免疫检测需要变性dna后才能与抗体结合，而edu因为其特有的炔羟基团可以与一些荧光染料发生“click”化学反应，无需变形，从而将细胞标记上荧光，因此应用更广泛。
>>>edu和brdu检测区别
brdu 检测增殖细胞的特点及原理
brdu（5-bromo-2-deoxyuridine，5-溴脱氧尿嘧啶核苷）是一种嘧啶类似物，其化学结构特点是溴替代了胸腺嘧啶环与５位c原子连接的甲基可竞争性掺入到s期新合成的dna中。brdu在细胞周期的s期和细胞一起孵育的brdu能渗入dna分子中，再结合brdu抗体与渗入dna的brdu特异性结合就能够检测到dna复制活跃的细胞。但brdu免疫检测有其缺点就是需要变性dna（必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解处理）后才能与抗体结合，但这就破坏了dna双链结构，影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。
图1：brdu渗入dna分子过程
edu 检测增殖细胞的特点及原理
edu（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐acetylene group‐２′脱氧尿嘧啶核苷）也是一种胸腺嘧啶核苷的类似物，其化学结构特点是脱氧胸腺嘧啶环上与５位c原子相连的甲基被acetylene group取代，在s期细胞增殖时可作为底物掺入到正在复制的dna链中，
edu在细胞增殖时能够插入正在复制的dna分子中，基于edu与染料的共轭反应可以有效地检测处于s期的细胞百分数。荧光染料可以同edu发生“click”化学反应（点击法），从而将增殖的细胞标记上荧光。可用于细胞成像、流式、细胞示踪、dna损伤修复检测、线粒体活性检测以及病毒增殖活性检测等，edu亦适用于活体注射，稳定，对活体无副作用。
与传统的免疫荧光染色(brdu)检测方法相比，edu检测法更简单、更快速、更准确，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖真实的情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
图2：edu渗入dna分子过程
表1：edu和brdu标记方法对比区别
>>>什么是“点击法”
基于edu的点击法标记技术是由铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应（图3），将其应用于细胞的原位标记需两步过程。首先，其中一个生物反应配体是由叠氮化物或炔烃与“构件”（如核苷酸，核苷，氨基酸，单糖或脂肪酸）连接构成；随后将另一是由荧光染料、生物素或其他检测试剂连接的互补炔烃或叠氮化物构成的反应配体在催化剂铜的存在条件下“点击”到位，完成反应
点击化学与使用溴脱氧尿苷(brdu)检测法不同，edu点击检测法不是基于抗体，无需dna变性即可检测掺入的核苷。edu点击检测法可以与r-pe、gfp等荧光蛋白复用提高效力，该技术的优势在于化学方面独特的小分子和低背景的标记物以及检测基团之间特异性共价反应。小分子的叠氮化物试剂可以有效地接触dna而无需对细胞进行破坏处理。进而简化了测定流程并且获得的结果与使用传统的brdu相似或更好
图3：click-it edu点击法检测核酸过程
>>>edu系列产品特点
荧光染料可以在铜离子催化下同edu发生“click”化学反应，将增细胞标记上相关的荧光。可用于细胞成像、流式、细胞示踪、dna损伤修复检测以及病毒增殖活性检测等，edu亦适用于活体注射，稳定，对活体无副作用。
edu检测的优点：
操作简单 — 仅需edu孵育；细胞固定化；荧光检测三步；检测快速 — 只需2.5 h；结果准确 — 标记率高且无需变性，更好地保护细胞形态；兼容性高 — 允许与多种抗体、荧光染料同时标记；应用性广 — 细胞成像、流式、细胞示踪、dna损伤修复检测、病毒增殖活性检测等。
1、click-it edu荧光成像观察（绿色、红色、远红色）
yefluor 488click-it edu点击法检测hela细胞， yefluor 488click-it edu点击法检测hela细胞，
不加羟基脲（dna合成抑制剂） 加羟基脲（dna合成抑制剂）
yefluor 594 click-it edu点击法检测hela细胞， yefluor 594 click-it edu点击法检测hela细胞，
不加羟基脲（dna合成抑制剂） 加羟基脲（dna合成抑制剂）
yefluor 647 click-it edu点击法检测hela细胞， yefluor 647 click-it edu点击法检测hela细胞，
不加羟基脲（dna合成抑制剂） 加羟基脲（dna合成抑制剂）
2、click-it edu流式细胞仪观察（绿色、红色、远红色）
a1 : yefluor 488click-it edu点击法检测hela细胞， a2: yefluor 488click-it edu点击法检测hela细胞，
加羟基脲（dna合成抑制剂） 不加羟基脲（dna合成抑制剂）
b1 : yefluor 594click-it edu点击法检测hela细胞， b2: yefluor 594click-it edu点击法检测hela细胞，
加羟基脲（dna合成抑制剂） 不加羟基脲（dna合成抑制剂）
c1 : yefluor 647click-it edu点击法检测hela细胞， c2: yefluor 647click-it edu点击法检测hela细胞，
加羟基脲（dna合成抑制剂） 不加羟基脲（dna合成抑制剂）
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参考资料
1. chehrehasa f, meedeniya ac, dwyer p, abrahamsen g, mackay-sim a. edu, a new thymidine analogue for labelling proliferating cells in the nervous system. j. neurosci. methods. february 2009, 177 (1): 122–30. pmid 18996411. doi:10.1016/j.jneumeth.2008.10.006.
2.cavanagh, brenton; walker, t. norazit, a. meedeniya, a. c. thymidine analogues for tracking dna synthesis.. molecules. september 2011 15, 16 (9): 7980–93. pmid 21921870.
3.罗涛, 王彤敏, 李力燕. edu与brdu在检测细胞增殖中的特点及应用进展[j]. 重庆医学, 2015(32).
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