试剂盒特异性因素:
1、固相载体的选择。elisa中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种,以微量滴定板最为常见[1]。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯elisa板由于原料的不同和制作工艺的差别,各产品的质量差异很大。因此,在选择试剂盒同时要对其使用的微孔板型号进行认证,评估。
2、包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是间接elisa中,试剂的特异性取决于使用抗原的纯度。目前由于技术条件的限制,包被用抗原或抗体的纯度不可能达到100%,所以有些非特异性显色不可避免,只能尽可能提高纯度,提高特异性。目前使用的包被抗原一般为合成多肽抗原。
3、包被抗体的效价。具有高亲和力和高特异性的包被抗体,是决定试剂特异性的重要方面。
4、封闭。是elisa中重要的一步,目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙[2],减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰。