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国产电色谱系统可分离蛋白质及多肽你知道吗?

2019/4/22 15:01:51发布67次查看

   国产电色谱系统可分离蛋白质及多肽你知道吗?  国产电色谱系统是一种集高效毛细管电泳(hpce)和高效液相色谱(hplc)的分离机制于一体的方法,它的溶质流动是通过一个电驱动原理,分离机制是不仅依靠溶质—固定相间的反应作用,还有电渗流的作用。在最普通的毛细管电色谱模式中,毛细管填充了化学改性的硅胶颗粒,固定相如同hplc中一样。一个柱塞,置于溶质到达检测窗口之前的位置,以用于阻止固定相的流失和光信号的失真。塞子和固定相颗粒都可能导致气泡的产生,从而导致电渗流的中断,为了大限度地减少气泡产生的可能性和排除堵塞,这在小直径的管子内是很困难的,因此发展了一种在毛细管内壁蚀刻的毛细管电色谱方法,这个过程同在气相色谱中为了增加毛细管柱内壁表面积而涂上一层聚合物的方法相似,在精确控制的温度和反应时间下使用了二氟化氢铵作蚀刻剂。较早的研究描述在300-400℃时蚀刻毛细管3-4小时,这些条件明显地增加了表面积,从而充分地增大了蛋白质、多肽和四环素与十八烷基固定相间的分配因子(在溶质和蚀刻柱内壁上的有机部分之间)。
  用有机物蚀刻毛细管的方法是以硅烷化—氢化硅烷化反应为基础的,在这个过程中,毛细管中被蚀刻过的表面先同三乙氧基甲硅烷反应,以产生一个氢化物表面,在理想的条件下,一单层三乙氧基甲硅烷被沉淀在柱子表面,以致大部分硅烷醇被氢化物取代,然后通过注入一种含有烯烃的溶剂和一种适合的催化剂,如六氯铂酸,让其流过毛细管,有机成分就立即被附在氢化物上,这个过程被称作氢化硅烷化过程,在前面的研究中,被使用的烯烃为1-十八烯烃,硅烷化-氢化硅烷化反应方法也被用于毛细管电泳中未蚀刻的毛细管柱,以涂附丙烯酰胺聚合物。键合方法的一个好处是在有机部分和表面间形成了一稳定的硅—碳键合层。实验证明聚合丙烯酰胺毛细管通过氢化物间接键合比有机硅烷化更稳定,在这个研究中,被蚀刻的毛细管首先被氢化物介质键合,随后和7-辛烯基-1,2-二醇(7-od)或1-十八烯烃反应,以产生适合于电色谱的柱子,在hplc中7-od键合材料已经表现出了比二醇基更小的疏水性,以致在用毛细管电色谱分离混合物产生更适合的特性,在这些混合物中,一个适合的介于疏水性和亲水性间的平衡是必不可少的,例如生物分子。
  电色谱过程:二醇基和十八烷基毛细管柱先进行预处理,由注射泵注入十倍柱体积的缓冲溶剂通过柱子,流动相要先经过超声波脱气处理,然后用氦气清洁。电动进样在5kv电压下,6秒完毕,所有样品均在211nm下检测。
  研究结果表明关于在化学改性蚀刻柱上溶质—键合相作用的研究,它不同于传统方法,是电色谱的另一种方式,原因在于它以开口管结构代替了填充柱,实验的结果表明了键合蚀刻柱同空管柱相比具有明显不同的保留特性,另外,不同的有机成分涂附在蚀刻过的表面,分离的能力也会不同,如同hplc中依赖不同的化学键合配位体一样,这种方式的电色谱的另一些基本特性以及各种各样化学改性蚀刻柱制作的进一步研究正在取得进展。
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