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中枢神系统纤维的再生

2019/4/19 16:12:58发布96次查看
    中枢神系统纤维的再生:此法采用定量夹心酶联免疫技术。特异性抗体对于c7已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何c7目前的固定抗体的约束。生物素共轭的抗体特异于c7除去任何未结合的物质后,加入到孔中。抗生物素蛋白共轭的辣根过氧化物酶(hrp)的洗涤后,加入到孔中。经过洗涤,以除去任何未结合的抗生物素蛋白的酶试剂,底物溶液加入到孔中,显色成比例的量的初始步骤中的约束的c7。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。
1、准备好所有试剂,工作标准和样品。
2、请确定井数的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥剂,密封保鲜袋,将未使用的井在4°c的含量布局表
3、每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时,在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。
4、每孔中取出的液体,不洗。
5、向每孔中加入100μl生物素抗体(1倍)。盖上一个新的胶粘带。孵育1小时,在37℃下(生物素抗体(1x)可能会出现混浊。预热至室温,轻轻混匀,直到出现均匀解决方案。)
6、吸液的各孔和洗涤,共洗涤三次重复该过程两次。洗净,每孔填充洗涤缓冲液(200μl)使用喷瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,静置2分钟,彻底清除液体的每一步是必不可少的良好的性能。最后一次洗涤后,清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
7、向每孔中加入100μl的hrp-抗生物素蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一个新的粘接剂条。温育1小时,在37℃下
8、重复的愿望/洗涤过程中,在步骤6的5倍。
9、将90μltmb底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟,在37℃下避光
10、一站式解决方案,每孔加入底物,轻轻晃动酶标板,以确保充分混合。
11、在5分钟内,设置至450nm,使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正,设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接,可能会比较高,不太准确。
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