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人异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA测定试剂盒

2019/4/16 13:31:14发布77次查看
人异柠檬酸脱氢酶(icd)elisa测定试剂盒双抗体夹心elisa法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体含量。
液体类标本:
包括血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清液等。
血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,如保存过程中如有沉淀,请再次离心。
血浆:
应根据标本的要求选择edta,柠檬酸钠或者肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,在离心20分钟(2000-3000转/分),仔细收集上清,如保存过程中有沉淀,请再次离心。
尿液:
用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,如保存过程中有沉淀,请再次离心。
细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用pbs(ph7.2-7.4)稀释细胞悬液,当细胞浓度达到100万/ml左右,通过反复冻融,使细胞破坏并释放细胞内的成份,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,如保存过程中有沉淀,请再次离心。
组织标本:
切割标本后,称取重量,加入一定量的pbs(ph7.4),用液氮迅速冷冻保存备用,标本融化后仍保持2-8℃的温度,加入一定量的pbs(ph7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,分装后留一份待检测,其余冷冻备用。
人异柠檬酸脱氢酶(icd)elisa测定试剂盒相关实验研究:
树鼩血清中乳酸脱氢酶(ldh)同功酶和异柠檬酸脱氢酶(icd)的测定
摘要:乳酸脱氢酶同功酶系指能催化同一反应(乳酸(?)丙酮酸),而结构上却不完全相同的一组酶类。由于其结构上存在微小的差异,以至其热稳定性、抑制剂、激活剂、亲和力及免疫特性等理化性质各不相同。因而,可以分离出不同的组分,采用电泳方法可将其分为ldh1~55条区带。近年来,在实验医学方面,利用树鼩(tupaiabelangeri chinensis或tupaia glis)作为研究对象者日益增多,如用树鼩作甲、乙型肝炎的动物模型等。有关树鼩的生理正常值已有一些报导。但到目前为止,未见国内外有关树鼩血清ldh同功酶以及icd方面的资料报道。本文就我们实验室测定的树鼩血清ldh同功酶和icd的结果报告如下,供实验动物工作者参考。 
试剂盒的组成: 
(1)结合物及标本的稀释液;
(2)洗涤液,在板式elisa中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(3)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(4)酶的底物;
(5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中);
(6)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)
用途:科研与实验专用试剂,不得用于临床诊断。
检测种属:人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠elisa检测试剂盒等种属。
标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。 
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elisa试剂盒的包被条件与封闭:包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的ph等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用ph9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用ph7.2的磷酸盐缓冲液及ph7~8的tris-hcl缓冲液作为稀释液的。通常在elisa板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的zui适当浓度随载体和。抗体和蛋白质抗原一般采用ph9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用ph7.2的磷酸盐缓冲液及ph7~8的tris-hcl缓冲液作为稀释液的。通常在elisa板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的zui适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化,每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。
封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低,吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙,封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥在elisa其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。zui常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂,其zui大的特点是价廉,可以高浓度使用(5%)。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用,但由于奶粉的成份复杂,而且封闭后的载体不易长期保存,因此在试剂盒的制备中较少应用。 
封闭是否必要,取决于elisa的模式及具体的实验条件。并非所有的elisa固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被时,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中,封闭一般是不可少的。包被好的elisa板干燥后放入密封袋或锡袋中,在低温可保存数月。
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