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人内脏素 (Visfatin) ELISA检测试剂盒说明书

2019/4/15 18:08:27发布57次查看
试验原理:
       visfatin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(elisa).已知visfatin浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将visfatin和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的hrp。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物a、b,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中visfatin的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份 96孔配置 48孔配置
96/48人份酶标板 1块板(96t) 半块板(48t)
塑料膜板盖 1块 半块
标准品:200ng/ml 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml)
空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml)
标准品稀释缓冲液 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml)
生物素标记的抗visfatin抗体 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml)
亲和链酶素-hrp 1瓶(12ml) 1瓶(5ml)
洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml)
底物a 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
底物b 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
自备材料:
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
样品收集、处理及保存方法:
1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原
和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红
细胞迅速小心地分离。
2、 血浆……edta、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作注意事项:
● 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
● 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
● 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
● 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物a、b液时,避免使用带金属部分的加样器。
● 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
● 底物a应挥发,避免长时间打开盖子。底物b对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取od值。
● 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
● 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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