中国动物卫生与流行病学中心 樊晓旭博士
“基于实验室检测,我们不但可以分析一些疑似感染asfv案例,而且可以确诊一些asfv感染案例,这对进一步控制asfv传播非常重要。”樊晓旭分析说,由于asf没有疫苗,目前实验室诊断方法以检测特异性抗体为主。其他的方法,“可采用病毒分离法,或者通过检测病毒核酸(基因组dna)的方法,如常规pcr(聚合酶链式反应)、荧光pcr,还可以采用elisa(酶联免疫吸附试验)来检测血清抗体,如ielisa(间接阻断酶联免疫吸附试验)和belisa(阻断酶联免疫吸附试验)。此外,通过采用双重pcr方法,可以区分非洲猪瘟与传统猪瘟。”
“我们开发了快速qpcr检测方法、rpa(重组酶聚合酶扩增)方法来对asfv进行检测。我们还开发了一些商业用ielisa测试包,来对asfv抗体进行检测。”樊晓旭强调说,“由于采用pcr和qpcr类检测试剂敏感性非常高,同时会受抑制剂影响,如果核酸被破坏,可能会出现一些假阳性的检测结果;再者,如果样品质量不够好,也可能会出现一些假阳性的检测结果。”
“我们确定asfv是阳性、阴性,还是可疑,重要的是需要避免交叉感染以及控制假阳性结果的出现。在交叉污染过程当中,比如asfv阳性样本或者说在dna提取过程当中的一些阳性控制,则显得尤为重要。”樊晓旭表示,中国首例asf疫情发生后,中国动物卫生与流行病学中心通过对来源于此次疫情2头病死猪的样本b646l/p72 基因片段普通pcr产物进行正反向测序并绘制遗传进化树。分析结果显示,此样本病毒属于基因ii 型,与目前在俄罗斯和东欧流行的格鲁吉亚毒株(georgia 2007)同属于一个进化分支,提示疫情可能来自俄罗斯和东欧疫情国家。
樊晓旭称,中国加强了对非洲猪瘟病毒的检测,除非得到农业农村部的支持,否则不允许进行任何的病毒分离和动物感染。截至目前,全国已确定29个确诊实验室可以及时确诊asf疫情。
对于asfv检测而言,实验室的安全性至关重要。“我们要保证相关工作人员的健康,并要让相关环境方面也要能够满足要求,同时还需要消除一些潜在风险。如,在我们实验室里,不允许吃东西、喝水、吸烟以及涂抹唇膏等化妆品。”樊晓旭说,“在对不同样本进行处理时,需要采取区域分离措施,比如进行elisa和pcr检测适需要分开,在不同区域进行操作。”