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JM110 感受态细胞 产品说明书

2019/4/4 14:20:32发布57次查看

产品规格
jm110:                                                     100μl/支
puc19 (control vector,10pg/μl):                   10μl
保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 
基因型
rpsl (strr) thr leu thi-1 lacy galk galt ara tona tsx dam dcm supe44 δ(lac-proab) /f′ [trad36 proab laciqlaczδm15] 
产品说明
jm110菌株具有硫酸链霉素抗性(strr);是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株,提取得到的质粒dna,可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割;laciqlaczδm15的存在使jm110可以进行蓝白斑筛选,但转化效率不高,一般不用于质粒构建,只适用于质粒转化。jm110感受态细胞经特殊工艺制作,puc19 质粒检测转化效率约107 cfu/μg dna。
操作方法
1. jm110感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的dna(质粒或连接产物)并用ep管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2yt或lb),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2yt或lb培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标dna,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
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