目前对于三聚氰胺的检测，最常规的方法为lc方法。但由于该化合物含有三个有机氮基团，极性强，在普通c18反相柱上难以保留，无法达到分离效果。文献报导的hplc方法基本都须加入离子对试剂以增加三聚氰胺的保留，但辛烷磺酸钠等离子对试剂恰恰限制了lc-ms的应用。本文采用新型的scx-c18混合填料色谱柱测定三聚氰胺，该柱内填充的是均匀混合的scx和普通c18填料颗粒，兼具离子交换和反相分离的特点，检测中不需加入离子对试剂，还可应用与lcsolution联机，操作简便，灵敏度高。
仪器概况
本实验使用岛津prominence lc-20a高效液相色谱仪系统。lc-20a是岛津制作所投入整体力量开发的新一代高效液相色谱仪，具有以下特点：优越的基本性能，轻松满足客户对仪器严格的要求；全自动化操作，实现了分析的高效率；高度对应网络要求的综合管理系统，改善分析工作环境。
本次实验所用仪器的具体配置为lc-20ad输液泵，dgu-20a3在线脱气，sil-20a自动进样器，cto-20ac柱温箱，spd-20a紫外可见检测器，cbm-20a控制器和lcsolution色谱工作站。
分析方法
色谱柱：capcell pak cr(1:4) 4.6×150mm 5μm
检测波长：243nm
流动相：15mm醋酸铵缓冲液(ph3.0):乙腈=7:3
流速：1.2ml/min
柱温：30℃
进样量：10μl
洗脱方式：等度洗脱。
样品前处理方法
取奶粉样品0.5g，准确加入5ml三氯yi酸溶液和0.2ml乙酸铅溶液，摇匀，超声提取20min。转入离心管，在10000r/min离心机上离心5min，取上清液, 0.45μm滤膜过滤，上机测定。
分析结果
1.保留时间与峰形
图1为本方法检测三聚氰胺标样的典型色谱图（样品浓度为5ug/ml）
图1 三聚氰胺标样图谱
由图1可见，本方法所测三聚氰胺保留时间为9.38min，峰形尖锐，对称性好。
2.精密度
取浓度为5μg/ml三聚氰胺标样，连续进样5次，结果如表1所示。
编号 保留时间(min) 峰面积(μv.s)
1 9.378 113178
2 9.388 112902
3 9.397 112677
4 9.397 112874
5 9.409 112909
average 9.394 112908
%rsd 0.12 0.16
表1 保留时间与峰面积的重现性
由表1结果可见，本方法测定三聚氰胺具有良好的精密度和重现性。
3.标准曲线
取标准品，用缓冲液稀释成浓度为0.5μg/ml、1.0μg/ml、5.0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的标准工作液，分别进样，得到校准曲线(见图2)。
图2 校准曲线
结果表明，该方法线性良好，相关系数为0.9999。
4.加标回收率
取奶粉空白样品，加入不同浓度的三聚氰胺标准工作液，使奶粉中最终含量分别为0.5mg/kg、5mg/kg和50mg/kg，结果如下：
图3 空白奶粉
图4 空白奶粉添加0.5mg/kg三聚氰胺
图5 空白奶粉添加5mg/kg三聚氰胺
图6 空白奶粉添加50mg/kg三聚氰胺
加样回收率结果如表2所示。
加样量(mg/kg) 计算结果(mg/kg) 回收率
% 平均回收率%
0.5 0.55 109.3 115
0.60 120
5.0 4.56 91.2 92.9
4.72 94.5
50 48.6 97.2 97.8
49.2 98.4
表2 3个不同浓度样品回收率
5.检测限和定量限
用软件计算出奶粉中三聚氰胺含量检测限为0.43mg/kg ，定量限为1.31mg/kg。
6.实际样品分析结果
按本方法测定某品牌的奶粉，得到的图谱如图7所示。两份重复样品中测得三聚氰胺的浓度分别为19.7和19.8mg/kg，重现性良好。(用反相离子对色谱法测得的两次结果分别为19.1和19.2 mg/kg)
图7 某品牌阳性样品检测结果
结论
本方法定量限为1.31mg/kg，具有操作简单方便，灵敏度较高和重现性好等优点。流动相中不用加入离子对试剂，为lcms的分析提供了可能。且样品经提取后可不用经过spe步骤即可进样，大大简化了分析过程，节省了分析成本。本方法适合奶粉中三聚氰胺含量的测定，特别是大批量样品的低成本快速检测。