strep-tactin琼脂糖凝胶ff
品  名
strep-tactin琼脂糖凝胶ff
英文名
strep-tactin nupharose fast flow, strep-tactin nupharose ff
目录号
nrpb42s(预装柱)
规  格
1 ml预装柱，5ml预装柱，10 ml预装柱，特殊规格订制
运  输
2 ~25℃，常压、避光
贮  存
20%乙醇，2 ~8℃
保质期
3年
相关介绍：
strep-tactin琼脂糖凝胶ff是一种将strep-tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于纯化strep ii标签蛋白。strepii标签为8个氨基酸的小标签（wshpqfek），由于标签小，仅为1 kda左右，一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
本产品的配基strep-tactin是链霉亲和素（streptavidin）的突变体，与链霉亲和素相比，strep-tactin对strepii标签的亲和能力至少强10倍以上，能够在温和的条件下与strep ii融合蛋白结合和解离。由于strep-tacin对strep ii标签具有高度特异性，一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。
strep ii标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱，该洗脱方式比较温和，一般不会影响蛋白质的性质。如strepii标签蛋白质能耐受碱性条件，也可用碱液洗脱，比如10 mm naoh等。
strep-tactin琼脂糖凝胶ff能耐受较高的碱性条件，可以用0.5 m naoh进行再生清洗和去除热源等。
另外，2-(4-羟基苯唑)苯甲酸（haba）也可用于凝胶再生，过量的haba能以竞争的方式替换脱硫生物素，但在无haba的缓冲液中，strep-tactin与haba会发生解离，从而使haba脱落，实现再生。
技术指标：
基质
4%琼脂糖凝胶微球
配基
strep-tactin
配基密度
≥5 mg/ml
填料粒径
60 ~180 μm
最大流速
800 cm/h
推荐流速
20 ~100 cm/h
ph稳定性
短时间ph 2 ~13；长时间ph 4 ~11
耐反压
0.3 mpa
载量
≥6 mg/mlstrepii标签蛋白
使用方法：
1 推荐缓冲液
纯化strep ii标签蛋白
结合缓冲液：100 mm tris-hcl，150 mm nacl，1 mmedta，ph 8.0；
或20 mm nah2po4，280 mm nacl，6 mmkcl，ph 7.4
洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 2.5 mm 脱硫生物素；
或10 mm naoh
再生缓冲液：0.5 m naoh；
            或结合缓冲液+1 mm haba
2 样品准备
上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物。
3 样品纯化
3.1平衡：取适量的strep-tactin琼脂糖凝胶ff装入合适的层析柱中，用蒸馏水清洗5个柱体积去除保存液，再用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100 cm/h。
3.2 上样：将准备好的样品上柱，建议流速为20 ~ 100 cm/h，可根据实际结合情况选择流速，能获得较好的效果。
3.3 再平衡：上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为100 cm/h。
3.4 洗脱：用洗脱缓冲液洗10 ~20个柱体积，建议流速为100 cm/h，收集的洗脱液应立即调节ph至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。
3.5 naoh再生：洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3 ~ 5个柱体积，并用0.5 mnaoh再生3 ~ 5个柱体积，再用蒸馏水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。
3.6haba再生：用脱硫生物素洗脱目的蛋白的，还可以用haba缓冲液再生，一般用haba的结合缓冲液洗15个柱体积，再用结合缓冲液洗30个柱体积，然后可以用20%乙醇保存柱子，或进行下一步纯化。haba上柱后凝胶颜色会变为红橙色，在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色，这种再生方式一般使用体积会大些。

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