放射免疫分析由于敏感度高、特异性强、精密度高、并可测定小分子量和大分子量物质,所以在医学检验中应用极为广泛,常用于测定各种激素(如甲状腺激素、性激素、胰岛素等)、微量蛋白质、肿瘤标志物(如afp、cea、ca-125、ca-199等)和药物(如氯丙嗪、庆大霉素等)等。各种检测项目均有试剂盒供应,所以在国内被广泛采用。
放射免疫分析(ria)是以放射性核素作示踪剂的标记免疫分析方法,它具有高度灵敏性、特异性和性等特点,特别适用于激素、多肽等含量微少物质的超微量分析。自20世纪50年代末*以来,ria被广泛地应用于生物医学的各个领域。
经典ria是采用标记抗原和非标记抗原竞争性结合有限量特异性抗体的反应。使放射性标记抗原和未标记抗原(待测物)与不足量的特异性抗体竞争性地结合,反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。用反应式表示为:
*ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原ag有相同的免疫活性,两者以竞争性的方式与抗体ab结合,形成*ag-ab或ag-ab复合物,在一定反应时间后达到动态平衡。如果反应系统内加入的*ag和ab的量是恒定的,且*ag和ag的总和大于ab有效结合点时,则*ag-ab生成量受ag量的限制。ag增多时,ag-ab生成量也增多,而*ag-ab生成量则相对地减少,同时游离*ag也增多。因此,*ag-ab与ag的含量呈一定的函数关系。如采用一种有效的分离方法,将*ag-ab和ag-ab复合物 (以 b表示)与*ag、ag(以f表示)分离,并测定b和f的放射性,可有以下规律:如样品中ag增多,则b的放射性降低,f的放射性增高,即ag与b成反比。计算b/f或b/t值 (t=b+f),即可算出样品中ag的含量。由于 ria是以放射性标记与非标记抗原竞争性地与抗体结合为理论基础,故又称为竞争性放射饱和分析法。