实验方法原理    25i-udr（125i-2′脱氧尿嘧啶核苷）是胸腺嘧啶核苷的类似物，作为dna合成的前体物，能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核dna链上。因此，可用125i-udr标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞，以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞，进行体外nk细胞活性检测。被效应细胞杀伤的靶细胞溶解后可释放125 i-udr，用γ-计数仪测定其放射性强度，以125i-udr释放百分率表示nk细胞的活性。
实验材料    yac-1细胞
试剂、试剂盒    125i-udr（125i-2′脱氧尿嘧啶核苷）胰蛋白酶dna酶5-氟脱氧尿嘧啶核苷rpmi-1640培养液
仪器、耗材    塑料试管γ-计数仪离心机
实验步骤    
一、材料
1. 125i-udr ：125i的物理半寿期为59.7d。
2. 胰蛋白酶：用无ca2+、mg2+的hanks液配制成3mg/ml，小量分装，-20℃冻存。
3. dna酶：用hanks液配成50μg/ml，小量分装，-20℃冻存。
4. 5-氟脱氧尿嘧啶核苷（5-fudr）用生理盐水配制成1×10-3 mol/l，4℃冰箱保存。
5. 其余材料同上。
二、操作方法
1. 靶细胞的制备：取培养24～48h的靶细胞1ml（5×105 /ml），分别加入5-fudr 4～6μl和125i-udr 6μci，混匀，置37℃培养2h，取出后用含5%ncs的1640营养液洗涤3次，每次离心1500r/min，2min，最后用完全rpmi-1640培养液悬浮，计数活细胞。用γ-计数仪检测标记率，一般可达1～2cpm/细胞即可；
2. 效应细胞的制备：用常规方法分离pbmc或小鼠脾细胞，最后用完全rpmi-1640培养液悬浮并计数；
3. 效-靶细胞作用：调整效应细胞和标记的靶细胞浓度，分别加入塑料试管中，效/靶细胞比例为100:1。同时设只加标记靶细胞的自然释放对照管，每份标本和对照管均设3个复管，每管均用完全rpmi-1640培养液补足体积至1ml，混匀，离心1500r/min，2min，以促进效-靶细胞作用，置37℃，5%co2温箱中培养18h。
4. 酶处理：取出效/靶细胞培养物，1500r/min离心2min，弃上清，于每管中加入胰蛋白酶和dna酶各0.1ml，混匀后置37℃水浴30min，促使已受损伤的靶细胞释放125i-udr，然后于各管中加入0.8ml冷hanks液，以终止酶反应。1500r/min离心2min，分别吸出各管上清0.5ml置于另一个塑料试管中。
5. 放射性测量和结果计算：用γ-计数仪分别测量每管上清和细胞部分的cpm值，并按下式计算125i-udr释放率和nk细胞活性，取三管均值作为nk细胞活性。
125 i-udr释放率（%）= （0.5ml上清cpm值×2）/（0.5ml上清cpm值+0.5ml细胞悬液cpm值）×100％
nk细胞活性（%） =试验管125 i-udr释放率 - 对照管125 i-udr自然释放率。
一般要求125i-udr自然释放率<10％，检测小鼠脾细胞nk活性用yac-1细胞作为靶细胞时，检测前可不经过酶处理。
收起 
注意事项    
1. 该标记法需要长时间的孵育，用酶处理可增加方法的敏感性。
2. 要获得较理想的结果，关键在于对靶细胞标记前的代传处理。使细胞处于对数增长期的活力状态，以达到最适的标记率和增强细胞对放射性同位素毒性作用的抗力，从而降低自然释放。
3. 因为如果发生污染就要丢弃培养的细胞，重新开始。
其他    
1. nk活性计算：
同位素释放%（nk活性）=（实验组cpm一自然释放cpm）/（最大释放cpm一自然释放cpm）x100
自然释放%=（自然释放cpm/最大释放cpm）x100
此结果中列出的同位素释放%,即代表nk活性。
2. 目前常用铬酸钠（na51cro4）及125i一脱氧尿嘧啶核苷（125i-udr）标记祛，两种方祛各有利弊。
51cr优点：敏感、简便、流程短、重复性好，缺点为半衰期短、自然释放高。
125i-udr优点：半衰期长、自然释放低、适于孵育时间较长的实验。缺点为敏感性较低、流程长。