检测类型行业检测	行业类型食品药品
货号thinkgene004

蛋白免疫印迹western blot
蛋白免疫印迹（western blot, wb）是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法，用于检测经电泳或斑点杂交后固定于膜上的蛋白质的检测。特异、稳定的液态酶标抗体和相应的底物，保证了快速、准确的检测；避免了放射性物质的使用，现为蛋白分析的一种常规技术，对蛋白进行定性和半定量分析。
试验流程：
1. 蛋白质抽提：
组织样品：取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白（或核蛋白）抽提试剂，匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
细胞样品：每份样品取106～107细胞，pbs清洗细胞，去pbs加0.1~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白质定量：按bca蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. sds-page电泳：将准备好的样品液和预染蛋白 marker分别上样，电泳分离蛋白。
4. 转膜：蛋白转移到pvdf膜，300ma恒流条件下，4°c转移90分钟左右。
5. 封闭和抗体孵育：膜在5%脱脂奶粉(磷酸化蛋白用bsa)溶液中室温封闭1小时；加入一抗4°c孵育过夜，抗原抗体结合；加入hrp标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。
6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经x胶片曝光显影。
7. western blot数据分析：可定性、半定量分析。
样品要求：
裂解样品总蛋白量＞500μg/样品；
细胞样品总蛋白浓度＞1mg/ml；
组织样品总蛋白浓度10-15mg/ml。
客户需提供新鲜或正确保存的蛋白、目的蛋白阳性表达样品（有阳性表达的细胞或组织），检测目的蛋白的一抗（建议由康颜生物代购）。
服务说明：
1. 建议提供目的蛋白阳性表达样品（纯蛋白、有阳性表达的细胞或组织）作为阳性对照；
2. 每张膜可检测1-9个样品；
3. 一抗需在正确条件下保存，避免污染及反复冻融；
4. 如需康颜生物进行数据分析，请另询价。
提交的产品和资料：
ap显色提供wb膜一张，hrp压片提供***终的x光片，另附一份膜或胶片扫描图。蛋白浓度以及灰度分析（如果需要）及实验报告。
康颜成立于2010年，由3位归国博士领衔创办，技术员均为中科院博士毕业，拥有多年实验操作经验及课题申报、实验设计、实验操作、各类大型实验仪器使用、sci论文撰写发表经验。在国内众多技术服务公司中，我们技术团队实力强劲，服务方式新颖，无论大小实验，每个项目均由创办人（中科院博士学历，多年操作经验）独立全程负责完成。且公司依托上海各大科研平台，拥有众多贵重仪器设备使用经验及方法。立志于提供国内高品质的生物专业技术服务。
公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。公司服务内容包括常规技术服务如基因克隆，定点突变，蛋白质表达纯化及检测，细胞学相关实验等，也包括基因芯片检测平台，crispr/cas9技术服务，microrna相关服务，酵母实验服务，rna干扰技术服务，抗体制备及纯化修饰服务，课题整体外包，动物模型的建立及相关实验服务等。针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。

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