生物磁珠(zgswms)是一种新型的功能化固体载体,即包被有活性基因团的超顺磁性亚微米级或纳米磁性微球。
生物磁珠是分散在基液中而形成的磁性液体材料。兼具有液体的流动性能和固体磁性材料的特点,在外磁场的作用下可以定向移动和集中,撤去外磁场后稍加震荡或抽吸又可均匀分散于液体中,从而使固液相的分离变的十分快捷方便,通过简单的洗脱可以得到纯度很高的疤物质。
磁珠法提取dna过程示意图(以全血为例)
分为裂解、dna结合、洗涤、洗脱四步。
其中裂解液约有十分钟,结合10分钟,洗涤2次4分钟,洗涤10分钟,共计36分钟。
注:s32161—1(裂解液)s32161—2(结合液)s32161—3(洗涤液)
s32161—3(洗脱液)
磁珠法提取全血基因组dna步骤
1、 取100µl抗凝全血(使用前先震荡均匀,如全血不足100µl,可使用生理盐水 将其补充至100µl)到1.5ml离心管(ep管)中,150µl裂解液,点振15次,每次1秒,混合均匀(可用漩涡振荡器,1200—1800rpm)。然后使用离心管(ep管)置于恒温水箱中65°c温育10—15分钟。
2、 将ep管从温育设备中取出,加入300µl结合液,并立即加入混匀的磁珠悬液µl(磁珠悬液在使用前振荡混合均匀),点振15次使ep管内容物混匀,室温25℃放置10 分钟,其中每隔2—3分钟将ep管颠倒几下或点振5秒混匀。
3、 第一次磁分离:用左手拿住ep管,右手拿住长方形磁铁放到ep管下侧壁三分之二处,时间约半分钟,使磁珠都吸到管壁上,然后吸弃液体(一定要吸干净)。也可使用试剂盒中的磁架进行分离。
4、 将ep管放回到一般的非磁性试管架上,加入600µl洗涤液,点振15次混匀(或缓缓抽吸15次混匀),静置1分钟,然后取出ep管进行磁分离,使磁珠都吸到管壁上,然后吸弃液体(一定要吸干净)。
5、 重复步骤4一次。
6、 在ep管中 加入50µl ~ 100µl洗脱液,缓慢抽吸15次混匀,置于恒温水箱中65℃洗脱10分钟。每隔2~3分钟轻摇ep管几下。
7、 若不立即使用,则将ep管2~8℃存放即可。若立即使用,可用长方形磁铁或磁架进行分离,将磁珠都吸到管壁上,然后小吸取液体转移至新的离心管中,进行下游实验。
注:对血斑、血清等其他体液可参考此法进行提取。
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