mirna 是一类22碱基左右的非编码rna,能够被整合到沉默复合体(risc)中,使碱基互补的目标mrna沉默或降解,以实现其调控作用,与生物正常的生长发育以及各种疾病的发生都有着密切的关系。目前的检测手段包括northernblot 技术、芯片技术、基于pcr或滚环扩增(rollingcircleamplification,rca)的检测等,这些技术很难同时满足高灵敏度和高通量的需求;
启因生物独家引进美国nanostring公司的多基因表达计数系统ncounterassay system,它仅需100ng的rna即可对逾八百个特异的mrna转录子进行准确的定量;它无需酶促和扩增过程,其检测的敏感性和准确性与实时荧光定量pcr(rt—pcr)技术相当。检测系统包括样品制备工作站和数据分析仪,流程包括杂交、纯化固定、计数三个步骤。
检测特点:
精度和准确度:无需扩增,灵敏性和特异性高,并且准确识别度高,可以准确区分高度相似的mirna;
转录覆盖面全面:全面的代码集可供人类、小鼠、大鼠和果蝇等的mirna转录,并且每24小时可快速提供96个样品的上千万数据;
兼容性强:总rna,石蜡包埋组织总rna;
可定制:标准-mirbase覆盖版设置,条形码设置;
样本来源:
除了可对多种来源组织细胞提纯的核酸进行定量,还可对新鲜或冻存组织、细胞、细菌等的裂解物以及多聚甲醛固定石蜡包埋(formalin—fixedparaffin.embedded,ffpe)组织细胞的裂解物等直接进行定量检测。
产品:
nanostring技术能够高通量的检测800多种人和人-病毒mirna、600余种小鼠mirna和400余种大鼠mirna以及184种果蝇mirna,并进行图谱分析,而其灵敏度和特异性更与qpcr相当;
检测原理:
技术要点:
一段特殊的桥接寡核苷酸(bridgeoligo)分别特异的结合目标mirna和其对应的mirtag,并使两者共价连接,经过变性,mirna:mirtag复合物成为一条单链,这个复合物能够和特定的捕获探针、报告探针结合,并像普通的mrna一样被定量检测;
mirna表达谱高水平的敏感性、特异性、精度和线性度等使其广泛应用在肿瘤、神经生物学、发育生物学、干细胞等领域的研究。
nanostring技术应用实例:
1. luo e-c. etal., microrna-769-3pdown-regulates ndrg1 and enhances apoptosis in mcf-7 cells duringreoxygenation. scientific reports. august 01, 2014
图a:heatmap ofthe differentially expressed mirnas during reoxygenation(re-o2) usingnanostring ncounter® mirna expressionassays;
图b-e:nanostringncounter® mirna expression assays and real-time pcr validation ofmir-769-3p (b), mir-501-3p (c), mir-2276 (d), and mir-1282 (e) inre-o2
2. yang c-h. etal., microrna-21 promotes glioblastoma tumorigenesis bydown-regulating insulin-like growth factor-binding protein-3(igfbp3). jbc. july 24,2014
更多内容请咨询热线:021-63935065
e-mail:z
或登陆网站进行留言咨询:
上海启因生物科技有限公司
卢
15618102496