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T4 DNA连接酶

2018/7/31 14:16:40发布88次查看
  • 品牌:robustnique
  • 外观性状:
  • 酶系活力:
  • 温度适用范围:
  • 产品标准:
  • 保质期:其他

概述:
 该酶催化契合的双链dna或rna的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端dna之间的连接,还可以修复双链dna、rna或dna/rna杂交双链中的单链切口(1)。
 来源:
 纯化自重组e. coli菌株。
 应用:
 1. 限制性酶切片段的克隆(2)。
2. 将linker或adaptor连接到dna片段的平滑末端。
 反应条件:
 1× t4 dna连接酶反应缓冲液 [50 mmtris-hcl (ph 7.5 @ 25°c),10 mm mgcl2,10 mm dtt,1 mmatp],16°c温育。
 质量检测:
 核酸外切酶活性:50 µl不含atp的反应体系中,3,200u本酶与1 µg的hind iii消化的λdna在37°c下温育4小时,dna的电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性:50 µl不含atp的反应体系中,3,200 u本酶与1µg的puc19质粒于37°c下温育4小时,<5%的puc19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
纯度:经sds-page (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。
 质保声明:
 t4dna连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
 单位定义:
 (粘性末端连接活性定义):20 μl t4dna连接酶反应体系中,0.12 μm 5‘末端浓度,16°c反应30分钟,能使50%经hindiii消化的λdna片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。
 热失活:
 65°c温育10分钟即可失活。
 参考文献:
 1. engler, m.j. andrichardson, c.c. (1982). in p.d. boyer (ed.), the enzymesvol. 5, (p. 3). san diego: academic press.
2. sambrook, j., et al. (2001). molecularcloning: a laboratory manual, (3rd ed.), cold springharbor laboratory press.

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