实验目的：寻找靶蛋白的互作蛋白 
服务简介：       tap/ms是co-ip/ms的“近亲”，两者在寻找诱饵蛋白的互作蛋白以及纯化互作蛋白的原理类似。不同的是tap/ms引入了2个纯化标签（strep或sbp，flag），2步纯化，能有效纯化裂解液中的靶蛋白及其复合物，并使非特异性蛋白的数量降至较低水平。实验组和对照组洗脱的蛋白分别做质谱，从实验组结果中扣除对照组中的蛋白，即可鉴定出与靶蛋白互作的蛋白。技术优势：  1、tap/ms鉴定到的互作蛋白是细胞内与诱饵蛋白天然互作的，符合体内真实生理情况，可信度高。  2、采用两步纯化，能有效减少非特异蛋白的结合。服务内容:  1、构建flag-strep（或flag-sbp）双标签的靶基因表达载体；  2、包装慢病毒感染目的细胞，做成过表达细胞株，wb检测表达效果（基因大于2kb时，可能导致病毒滴度不足以感染细胞系，此时如需进行加药筛选构建稳转细胞系，则周期预计延长3-4周）；  3、细胞总蛋白，经streptactin 树脂（或strep磁珠）和anti-flag抗体两步纯化，并洗脱；  4、实验组和对照组的洗脱液分别用胰酶酶解；  5、lc-ms/ms分析，获得蛋白质的定量、定性信息；  6、实验组结果扣除对照组中的蛋白，即可得到与靶蛋白互作的蛋白。
服务项目 客户提供 结果交付 实验周期
tap/ms 1、诱饵基因的名称、序列、物种等信息或者诱饵基因的cdna模板等2、待研究的细胞（保证细胞状态良好）及其培养相关信息 1、构建好的慢病毒表达载体2、稳转细胞系(如做了筛选)3、实验组和对照组蛋白的质谱鉴定结果4、数据分析结果 预计2.5-3个月

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刘郁林
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