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一种更直接的方法对类黑精色素进行脱色

2017/5/17 3:05:13发布262次查看ip:101.229.231.41发布人:111

国外已有不少相关微生物的报道。在细菌方面,如Tondee等研究了植物乳杆菌对初始pH 6.0并添加营养物质的类黑精色素溶液的最高脱色率可达68% 株海洋丝状非异形细胞包氏颤蓝细菌在培养30天可脱色75%的类黑精色素溶液;Kumar等研究了苏云金芽孢杆菌,短芽孢杆菌和芽孢杆菌对四种不同合成类黑精的脱色效果。真菌的脱色效果普遍比细菌好,目前文献报道的有云芝菌、黄孢原毛平革菌、黑曲霉、烟曲霉、黄曲霉、链霉菌等。脱色率较高的有Watanabe等报道的云芝菌,在最佳条件下对合成类黑精脱色率为80%。某些黑曲霉在葡萄糖存在时脱色率可达65%,若无葡萄糖则不能脱色。Murata等从土壤中分离得到一株链霉菌TT 14,最佳培养条件下脱色率为64%。而目前,国内在此领域的研究多集中于实际废水如糖蜜酒精废水的脱色。
针对上述技术问题,
刘幽燕公开一种利用塔宾曲霉对类黑精色素进行脱色的方法,以达到对类黑精色素直接脱色的目的,使得对类黑精色素脱色更为直接,易于操作.
实施例1
(I)将类黑精色素放入装液量为60ml/250ml摇瓶稀释至A475=
3.5,外加蔗糖30g/L,NaNO3 1.5g/L,MgSO4.7H20 0.05g/L,KH2PO4 1.0g/L,并将 pH 调至 4.0。
(2)取出保藏的塔宾曲霉菌株转接PDA试管斜面培养基,放入生化培养箱中保持温度为30°C培养5天。用已灭菌的0.5%吐温80溶液多次冲洗孢子,加入玻璃珠振荡分散,过滤即得孢子悬液,血球计数板测定孢子悬液浓度。
(3)固定接种孢子数量为4.3X 14个/ml,以此计算所需加入孢子悬液体积。在无菌条件下,取相应体积的孢子悬液接种于预先制备好的类黑精色素液体培养基中,温度为39°C,150rpm振荡培养6d,取出摇瓶,抽滤分离菌体,取ImL滤液用0.1M,pH为5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液稀释10倍,可见分光光度计测脱色前后475nm处吸光度的变化。菌体放入烘箱105°C烘24小时,然后用电子分析天平称重。测得脱色率为53%,细胞干重为3.0lg/L0
实施例2
(I)将类黑精色素放入装液量为50ml/250ml摇瓶稀释至A475=
3.5,外加5g/L的果糖,NH4Cl 2.0g/L, MgSO4.7H20 0.5g/L,KH2PO4 0.5g/L,并将 pH 调至 7.0。
(2)取出保藏的塔宾曲霉菌株转接PDA试管斜面培养基,放入生化培养箱中保持温度为29°C培养4天。用已灭菌的0.5% Tween80溶液多次冲洗孢子,加入玻璃珠振荡分散,过滤即得孢子悬液,血球计数板测定孢子悬液浓度。
(3)固定接种孢子数量为4.3X105个/ml,以此计算所需加入孢子悬液体积。在无菌条件下,取相应体积的孢子悬液接种于预先制备好的类黑精色素液体培养基中,温度为30°C,350rpm振荡培养4d,取出摇瓶,抽滤分离菌体,取ImL滤液用0.1Μ,ρΗ5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液稀释10倍,可见分光光度计测脱色前后475nm处吸光度的变化。菌体放入烘箱105°C烘24小时,然后用电子分析天平称重。测得脱色率为30%,细胞干重为2.5g/L。
实施例3
(I)将类黑精色素放入装液量为50ml/250ml摇瓶稀释至A475=
3.5,外加果糖22g/L,蛋白胨 1.5g/L,MgSO4.7H20 0.25g/L,KH2PO4 1.5g/L,pH 调至 8.0。
(2)取出保藏的塔宾曲霉菌株转接PDA试管斜面培养基,放入生化培养箱中保持温度为31°C培养3天。用已灭菌的0.5% Tween80溶液多次冲洗孢子,加入玻璃珠振荡分散,过滤即得孢子悬液,血球计数板测定孢子悬液浓度。
(3)固定接种孢子数量为4.3X 14个/ml,以此计算所需加入孢子悬液体积。在无菌条件下,取相应体积的孢子悬液接种于预先制备好的类黑精色素液体培养基中,温度为40°C,150rpm振荡培养6d,取出摇瓶,抽滤分离菌体,取ImL滤液用0.1M,pH5.0乙酸-乙酸钠缓冲液稀释10倍,可见分光光度计测脱色前后475nm处吸光度的变化。菌体放入烘箱105°C烘24小时,然后用电子分析天平称重。测得脱色率为65%,细胞干重为3.26g/L。
本发明有益效果:
本发明具有安全有效、条件温和、二次污染少、环保经济等优点。而且,本发明提供了一种可高效脱色类黑精色素的菌种,该菌种4天培养对类黑精色素的最高脱色率可达75%;另一方面,该菌株的适应范围较广,在低转速或低pH下仍具有一定脱色能力。本发明提供的菌种和脱色工艺具有良好的生物脱色效率和潜在的经济效益,可为实际工业废水处理提供一种优良的菌种和生物处理方法。进一步的使对类黑精色素脱色方法更加多元化。
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